細(xì)胞輔助試劑在細(xì)胞培養(yǎng)、流式細(xì)胞術(shù)等實(shí)驗(yàn)中發(fā)揮關(guān)鍵作用。
細(xì)胞輔助試劑常見(jiàn)種類及其功能如下:
一、細(xì)胞培養(yǎng)輔助試劑
培養(yǎng)基
功能:提供細(xì)胞生長(zhǎng)所需的基礎(chǔ)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)(如氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽)和生長(zhǎng)因子。
類型:DMEM、RPMI-1640、MEM等,根據(jù)細(xì)胞類型選擇不同配方。
補(bǔ)充物:胎牛血清(FBS)、人血清、抗生素(如青霉素-鏈霉素)、谷氨酰胺等,增強(qiáng)細(xì)胞生長(zhǎng)穩(wěn)定性。
細(xì)胞解離試劑
胰蛋白酶:分解細(xì)胞間蛋白質(zhì),使貼壁細(xì)胞脫落,用于傳代培養(yǎng)。
EDTA:螯合鈣、鎂離子,抑制胰蛋白酶活性,常與胰蛋白酶聯(lián)合使用(如0.25%胰蛋白酶+0.02%EDTA)。
膠原酶:用于消化組織塊,釋放單個(gè)細(xì)胞。
細(xì)胞凍存試劑
凍存液:含DMSO(二甲基亞砜)和血清,保護(hù)細(xì)胞在低溫下免受冰晶損傷。
程序降溫盒:控制凍存速度,提高細(xì)胞復(fù)蘇存活率。
細(xì)胞附著因子
多聚賴氨酸、層粘連蛋白、纖維連接蛋白:涂覆培養(yǎng)皿表面,促進(jìn)細(xì)胞附著和鋪展,尤其適用于難貼壁細(xì)胞。
抗生素與抗污染試劑
青霉素-鏈霉素:防止細(xì)菌污染。
支原體祛除試劑:定期使用可預(yù)防支原體污染,維持細(xì)胞健康。
二、流式細(xì)胞術(shù)輔助試劑
紅細(xì)胞裂解液(溶血?jiǎng)?
功能:利用低滲原理裂解血液或骨髓樣本中的紅細(xì)胞,富集白細(xì)胞。
特點(diǎn):溫和裂解,保護(hù)白細(xì)胞膜完整性,減少碎片產(chǎn)生。
流式染色緩沖液
功能:稀釋抗體、洗滌細(xì)胞,維持細(xì)胞活力并減少非特異性結(jié)合。
成分:含BSA(牛血清白蛋白)和疊氮鈉,提供等滲環(huán)境。
固定劑與破膜劑
固定劑:如4%多聚甲醛,固定細(xì)胞形態(tài),穩(wěn)定表面抗原。
破膜劑:使抗體進(jìn)入胞內(nèi)檢測(cè)細(xì)胞因子或核內(nèi)抗原(如轉(zhuǎn)錄因子)。
組合產(chǎn)品:溶血、破膜、染色一步完成,簡(jiǎn)化操作流程。
細(xì)胞死活染料
膜不可透過(guò)性染料:如7-AAD、PI,僅進(jìn)入死細(xì)胞,用于排除死細(xì)胞干擾。
可固定染料:如Zombie™系列,兼容固定和破膜步驟,提供更多熒光通道選擇。
Fc受體封閉劑
功能:阻斷免疫細(xì)胞(如B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞)表面的Fc受體,減少非特異性抗體結(jié)合。
類型:抗小鼠CD16/CD32抗體、Human TruStain FcX™等。
細(xì)胞刺激劑與阻斷劑
刺激劑:如PMA(佛波酯)+離子霉素,激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路,促進(jìn)細(xì)胞因子分泌。
阻斷劑:如Brefeldin A(BFA)、莫能霉素,抑制高爾基體功能,阻斷細(xì)胞因子分泌,使其在胞內(nèi)積累。